一、測定標準 參考食品國家標準:GB 4789.2-2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定》。 二、操作過程 1、前期準備: 根據國家標準,提前準備好要用的平板計數瓊脂、平皿、試管、稀釋液(生理鹽水)、三角燒瓶等,相應的材料進行滅菌處理(干熱滅菌或高壓滅菌)。 2、接收樣品: 收到樣品后,確認樣品包裝是否完好,登記樣品信息,并將其保存在2~8℃冰箱中,然后在取樣時取出。 3、樣品處理: 按照作業(yè)指導書操作,仔細閱讀實驗要求。一般實驗室收到的是干粉樣品、固體樣品、或者液體樣品等。假如收到干粉樣品,那么首先需要將其配置成水溶液(即水化)。根據實驗要求及經驗,進行預判,預估稀釋液倍數,溶解即可。 4、實驗前準備: 4.1實驗操作最好在超凈臺或者生物安全柜里操作,需要把超凈臺或者生物安全柜提前清理、消毒處理,確保實驗環(huán)境無菌。 4.2提前把要用到的平皿、試管、稀釋液等放到操作臺上紫外殺菌。 5、實驗操作: 5.1稀釋 將樣品從冰箱中取出達到室溫后開始取樣,在超潔凈臺或者生物安全柜下先用少許稀釋液(選取的生理鹽水)進行水化后吸入無菌瓶或袋中,再用剩余的稀釋液進行洗滌并全部轉入無菌瓶或袋中。 洗滌轉移時注意樣品瓶蓋的清洗和無菌操作,將全部的水化液進行均質混勻,一般作為原液立刻進行接種;再取25ml到225ml稀釋液中均質混勻,制成10-1梯度樣品勻液。 用1ml無菌吸管取1:10的樣液到9ml生理鹽水試管中,制成1:100的樣液,以此類推。再將幾個稀釋度的樣液接種到提前做好標記的無菌平皿中。 5.2傾注平板 將提前在水浴鍋里涼至46℃的平板計數營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿約15ml,并轉動平皿,混合均勻。同時將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1ml稀釋液(不含樣品)的滅菌平皿內作空白對照。傾注過程一般左手拿平皿,右手拿瓊脂瓶,左手將平皿打開30°左右的縫隙,傾注瓊脂大約到平皿底的二分之一處,左三圈、右三圈輕輕混勻,然后放到臺面上。待瓊脂凝固后,翻轉平板,置36±1℃溫箱內培養(yǎng)48±2h。 5.3觀察計數 24h觀察檢測結果有無異?,F象,是否有蔓延菌落出現。48h再按照GB 4789.2的要求進行菌落計數。在對結果進行分析后,選取檢測結果的平均值為最終數據。 三、注意事項 1、當無法預判樣品菌落總數含量時,需要梯度稀釋,此步驟尤其關鍵,必須盡可能地減少誤差。 2、傾注用培養(yǎng)基應在46℃水浴內保溫,溫度過高會影響細菌生長,過低瓊脂易凝固,不能與菌液充分混勻。如無水浴條件,應以皮膚感受較熱而不燙為宜。 3、傾注培養(yǎng)基的量規(guī)定不一,從12~20ml不等,一般以15ml較為適宜,平板過厚會影響觀察,太薄又易于干裂。傾注時,培基底部如有沉淀物,應將底部棄去,以免與菌落混淆而影響計數觀察。 4、傾注過程力度一定掌握好,絕不能把瓊脂濺出來。 5、為使菌落能在平板上均勻分布,檢液加入平皿時要盡可能放在中央部位,然后應盡快傾注培養(yǎng)基并旋轉混勻,可正反兩個方向旋轉,檢樣從開始稀釋到傾注最后一個平皿所用時間不易過長,以防止細菌有所死亡或繁殖。 6、瓊脂培養(yǎng)基放水浴鍋前一定要混合均勻,以防出現平皿不凝固現象;拿出傾注時要用噴有75%酒精的抹布擦拭干凈。 7、冷卻的過程不要著急,冷卻充分后再倒置放進培養(yǎng)箱培養(yǎng),放置的時候要盡量避免放到風機口處,每摞不要超過6個平皿。 8、檢測結束后所有的稀釋液樣品可放到冰箱里0-5℃冷藏,以備實驗出錯時再用。 成都壹科醫(yī)療為您提供江蘇康健,搖床及振蕩器、混勻器及離心機其它實驗室設備在四川、成都的產品、耗材的市場營銷、推廣、產品銷售、招投標、設備安裝、耗材更換、維修等工作。成都壹科醫(yī)療是您了解和購買江蘇康健,搖床及振蕩器、混勻器及離心機其它實驗室設備的好幫手。
|